כולם יודעים שיש הרבה מעבדות, אז כמה אנשים יודעים על מעבדות PCR? ומהן הדרישות הבסיסיות לתכנון מעבדות PCR? אז יהיה VOLAB Xiaobian לדון עם כולם~
1, פריסת מעבדת PCR
מעבדת בדיקת הגברה PCR מחולקת עקרונית לארבעה אזורי עבודה נפרדים: אזור אחסון והכנת ריאגנטים, אזור הכנת דגימה, הכנת תערובת תגובת הגברה ואזור הגברה ואזור ניתוח מוצר הגברה. על מנת למנוע זיהום- צולב, כניסה לכל אזור עבודה חייבת לפעול לפי כיוון יחיד, כלומר, רק מאזור האחסון וההכנה של ריאגנטים → אזור הכנת הדגימה → הכנת תערובת תגובת הגברה ואזור ההגברה → אזור ניתוח מוצר ההגברה. יש לבצע העברת מגיב ודגימה בין כל אזור ניסוי דרך חלון העברה.
2. תכנון מערכת אוורור מיזוג אוויר במעבדה ובקרת לחץ
למעבדות PCR אין דרישות טיהור קפדניות, אך על מנת למנוע אפשרות של-זיהום צולב בין אזורי הניסוי השונים, מומלץ להשתמש במערכת הפצת אוויר מלאה-. יחד עם זאת, יש לשלוט בקפדנות על הפרופורציה של שליחה ומתישה כדי להבטיח את דרישות הלחץ של כל אזור ניסוי.
2.1, אזור הכנת הדגימה
הפעולות העיקריות בתחום זה הן שימור דגימות, מיצוי חומצות גרעין (RNA, DNA), אחסון והוספתן לצינורות תגובה להגברה וקביעת סינתזת DNA. דרישות שיפוע הלחץ באזור זה הן: לחץ חיובי ביחס לאזור הסמוך כדי למנוע זיהום אירוסול מהאזור הסמוך לאזור זה. בנוסף, בשל האפשרות של זיהום-הנגרמת על ידי אירוסול במהלך פעולת הטעינה, יש להימנע מהליכה מיותרת באזור.
2.2. אזור אחסון והכנה של ריאגנטים
הפעולות העיקריות בתחום ניסוי זה הן הכנת ריאגנטים לאחסון, חלוקת ריאגנטים והכנת תערובות תגובה עיקריות. ריאגנטים וחומרים המשמשים להכנת דגימות צריכים להישלח ישירות לאזור זה ואסור לעבור דרך אזורים אחרים. יש לאחסן חומרי גלם מגיב באזור זה ולהכינם באזור לכדי ריאגנטים לאחסון הנדרשים. אין דרישות מחמירות לבקרת לחץ האוויר.
2.3, אזור ניתוח מוצר הגברה
הפעולה העיקרית בתחום זה היא קביעת שברים מוגברים. אזור זה הוא המקור העיקרי לזיהום של המוצר המוגבר. לכן, דרישות שיפוע הלחץ לאזור זה הן: לחץ שלילי ביחס לאזור הסמוך כדי למנוע דיפוזיה של מוצרים מוגברים מהאזור לאזורים אחרים.
2.4, הכנת תערובת תגובת הגברה ואזור הגברה
הפעולה העיקרית בתחום זה היא הגברה של DNA. כמו כן, ניתן לבצע באזור זה גם הוספת תבנית ה-DNA המוכנה (מאזור הכנת הדגימה) ותערובת התגובה העיקרית (מאזור אחסון והכנת ריאגנטים) להכנת תערובת תגובה וכו'. דרישות שיפוע הלחץ באזור זה הן: לחץ שלילי ביחס לאזור הסמוך למניעת דליפת אירוסול מהשטח. על מנת למנוע את הזיהום הנגרם מאירוסולים, יש להמעיט בהליכה מיותרת באזור. יש לבצע פעולות בודדות כגון דגימה בספסל הנקי.
3.1. חלוקה קפדנית של אזור העבודה
(1) ההגדרה של כל אזור ניסוי היא סבירה;
(2) לכל אזור ניסוי צריכים להיות סימנים ברורים (כגון מספרי בתים בולטים או צבעי קרקע שונים וכו') כדי למנוע בלבול בין פריטי ציוד וריאגנטים באזורי ניסוי שונים.
3.2, הגדרות מערכת סבירות
(1) הגדרת מערכת אוורור מיזוג- סבירה, נסה להשתמש במערכת המיזוג המלאה-שליחה-;
(2) בקרת לחץ קפדנית בזרימת האוויר מבטיחה דרישות לחץ שונות באזורי ניסוי שונים.
3.3, הפעולה הרגילה
(1) על הטכנאים של מעבדת בדיקת ההגברה לבצע הכשרה-ב-תפקיד ויכולים לעסוק בבדיקות הגברה קליניות רק לאחר שעברו את ההכשרה;
(2) במהלך פעולת הניסוי, על המפעיל ללבוש כפפות ולהחליף אותן לעתים קרובות. בנוסף, השימוש במכסים חד פעמיים במהלך הפעולה הוא גם אמצעי יעיל למניעת זיהום;
(3) עבודת הניקיון היא בזמן ונכון. לאחר סיום הניסוי, יש לנקות את האזור מיד. בנוסף לנוזלי החיטוי הקונבנציונליים לחיטוי משטחים או הקרנה וחיטוי של מנורות אולטרה סגולות, יש לעבור גם ציוד ניסיוני כלשהו לעיקור בלחץ גבוה.
3.4, ניהול קפדני
(1) פיקוח קפדני על הצוות הנכנס ויוצא מהמעבדה. אנשים שאינם קשורים לניסוי לא ייכנסו או ייצאו מהמעבדה כרצונם, ובמידת הצורך יקימו מעברים ודלתות עצמאיות אל ומכל אזור הניסוי.
(2) צמצם למינימום הליכה מיותרת באזור הניסוי כדי לצמצם את האפשרות של-זיהום צולב.
(3) אזור ניתוח המוצר המוגבר הוא המקור החשוב ביותר לזיהום של המוצר המוגבר. לא ניתן להשליך את תמיסת הפסולת למעבדה. יש להשרות אותו בתמיסת החיטוי ולאחר מכן לזרוק אותו במקום רחוק מהמעבדה. העצות המשומשות הן חד פעמיות. יש גם לחטא ולעקר את החומרים ולאחר מכן לטפל באופן אחיד, כמו שריפה;
(4) אזור ניתוח מוצרי ההגברה עשוי להשתמש במוטציות גנים מסוימות ובחומרים רעילים, ויש להקדיש תשומת לב מיוחדת להגנת הבטיחות של הנסיין.
3.5. מתקני מעבדה מלאים
מתקנים תומכים מעבדתיים שלמים הם תנאים הכרחיים להבטחת עבודת הניסוי. הציוד והמכשירים המתאימים צריכים להיות מצוידים בהתאם לתוכן הניסוי השונה של כל מעבדה, כגון ספסלים נקיים במיוחד, צנטריפוגות ומזינות דגימות.